基于UPLC指纹图谱及多成分含量测定的火草质量控制研究

火草灸是彝族医用于治疗寒湿性病症的特色适宜技术,火草作为火草灸的施灸材料,临床用药混乱,无质量控制相关研究。该文针对火草的非挥发性成分,采用UPLC建立火草非挥发性成分化学指纹图谱及绿原酸等8个酚酸类成分的含量测定方法,采用多元统计分析方法寻找火草药材质量评价指标性成分,建立火草质量的综合评价体系。建立了49批火草药材UPLC指纹图谱,标定了20个共有峰,指认了新绿原酸、绿原酸等8个酚酸类成分。除3批药材外,火草药材的相似度均高于0.89,表明所建立的指纹图谱方法可用于火草药材的整体质量控制;火草中8个成分含量熵权得分与指纹图谱综合得分的相关系数为0.875(P<0.01),表明所测的8个成分可作为指标性成分对火草进行质量评价。进一步,结合指纹图谱共有峰与8个酚酸类成分的含量,进行多元统计分析,筛选得到绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C为火草质量评价指标。结果表明,所建立的方法简便、准确,可实现基于UPLC指纹图谱和多成分含量测定的火草药材质量控制,该结果可为火草的质量标准建立提供数据支撑。     

川赤芍实时荧光定量PCR内参基因的筛选与验证

川赤芍与芍药共同作为《中国药典》著名药材赤芍的基原植物,具有重要的药用价值,且在花卉市场的潜力巨大。筛选稳定可靠的内参基因是开展川赤芍分子研究的必要前提。该研究从川赤芍的转录组数据中选取Actin和GAPDH 2个内参基因作为候选基因,利用实时荧光定量技术(qRT-PCR)检测2个候选基因在川赤芍的不同组织(韧皮部、木质部、茎、叶、叶柄、子房)和不同生长时期(萌动期、开花期、休眠期)的表达水平,然后利用geNorm、NormFinder、BestKeeper、ΔCT和RefFinder综合分析2个内参基因表达的稳定性,结果表明Actin和GAPDH在川赤芍不同组织和不同生长时期中的表达模式均稳定。该研究进一步检测川赤芍转录组数据中8个基因(Pv-TPS01、Pv-TPS02、Pv-CYP01、Pv-CYP02、Pv-CYP03、Pv-BAHD01、Pv-UGT01、Pv-UGT02)在不同组织中的表达水平,结果表明,以Actin和GAPDH分别作为内参基因,8个基因在川赤芍不同组织部位的表达趋势均一致,验证了Actin和GAPDH作为川赤芍内参基因的可靠性。综上,该研究发现Actin和...     

铧头草质量标准研究

目的 建立铧头草质量标准。方法 采用显微鉴别、TLC对彝药材铧头草进行定性鉴别,HPLC法测定秦皮乙素含量,2020年版《中国药典》方法测定水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物含量。结果 显微鉴别特征明显,可见薄壁细胞、纤维束、螺纹导管、草酸钙簇晶、淀粉粒等。早开堇菜、心叶堇菜TLC特征斑点分离清晰。水分、总灰分、酸不溶性灰分含量分别不得超过13%、24%、7%,浸出物含量不得低于10%。秦皮乙素在0.05～0.80 mg/mL范围内线性关系良好(R²=0.999 5),平均加样回收率为100.17%、RSD为1.07%,早开堇菜中该成分含量不得低于0.10%,而心叶堇菜中不限。结论 该方法简便、准确、重复性好,可用于铧头草的质量控制。     

盐酸替扎尼定口腔崩解片溶出度的测定

目的建立盐酸替扎尼定口腔崩解片溶出度的测定方法。方法依照《中国药典》2000年版附录溶出度测定项下第一法,以水为溶出介质,转速为100 r.min-1,用HPLC法检测,检测波长为320 nm。结果在1~10μg.ml-1范围内,盐酸替扎尼定浓度与峰面积的线性关系良好(r=0.9999),高、中、低3种浓度的平均加样回收率为99.0%~99.4%,RSD为0.12%~0.15%;6批口腔崩解片样品的溶出度为92.0%~104.0%。结论所建方法操作简便、准确、可靠,适用于盐酸替扎尼定口腔崩解片的质量控制。     

白花丹醌的提取分离鉴定

目的对多民族药材白花丹(Phum bago zeylanicaL.)中的白花丹醌进行提取分离和鉴定。方法用硅胶柱层析分离;用TLC,IR,MS,NMR等技术鉴定结构。结果从白花丹中分离得到桔黄色针状结晶,根据理化性质、薄层色谱及光谱数据分析,鉴定为白花丹醌(P lumbagin)。结论为建立白花丹药材的质量控制方法打下了物质基础,对白花丹临床用药安全及进一步开发具有极其重要的意义。     

反相高效液相色谱法测定复方小檗片中盐酸小檗碱的含量

目的采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定复方小檗片中盐酸小檗碱的含量。方法用Krom asil色谱柱(5μm,250 mm×4.6 mm),流动相∶乙腈-水-磷酸二氢钾-十二烷基磺酸钠(500 m l∶500 m l∶3.0 g∶1.5 g),流速:1 m l.m in-1,柱温:40℃,检测波长为345 nm。结果在0.021 2~0.233 2μg之间,峰面积与进样量的线性关系为Y=3 513 092.99X-15 938.76(r=0.999 9),平均回收率为97.22%。测得3批片剂中盐酸小檗碱的含量分别为0.772,0.748,0.749 mg/片。结论所建方法简便、准确、重复性好,可用于复方小檗片中盐酸小檗碱的含量测定。     

基于色彩色差计的川楝子炮制前后含量和颜色变化

目的:建立了川楝子药材中川楝素含量的高效液相方法,采用在线式非接触红外控温炒药机炒制川楝子,比较川楝子炒焦前后川楝素的含量变化及药材颜色变化.方法:采用色彩色差计测量炒焦前后药材颜色变化;采用色谱柱为Wondasil C18柱,甲醇-水(1:1)为流动相,检测波长为217 nm,测定川楝素.结果:川楝素平均回收率为10...     

UPLC法测定不同海拔及不同采收期乌梅中枸橼酸和苹果酸

目的建立UPLC法测定不同海拔和不同采收期乌梅Prunus mume(Sieb.) Sieb. et Zucc.中枸橼酸和苹果酸的含有量。方法乌梅80%甲醇提取物的分析采用ACQUITY HSS C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm);流动相乙腈-0.2%磷酸水,梯度洗脱;体积流量0.2 mL/min;检测波长210 nm;柱温35℃。结果枸橼酸、苹果酸分别在0.516～1.596、0.496～1.627μg/mL范围内线性关系良好(R~2≥0.9996);平均加样回收率分别为100.36%、100.39%,RSD 1.43%、1.54%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于乌梅的质量控制。     

乙型肝炎病毒抑制肝细胞免疫检查点PD-1配体基因表达的研究

目的 在细胞水平上分析乙型肝炎病毒(HBV)复制及其编码的X基因(HBx)表达对细胞基因表达谱的影响,特别是免疫相关基因表达水平的变化.方法 通过慢病毒和pcDNA瞬时转染过表达HBx基因,利用RNA-Seq和RT-qPCR等方法检测免疫相关基因的表达水平,并在HBV复制细胞系中进行验证.结果 HBV复制和HBx表达可以剂量依赖性抑制免疫检查点程序性死亡分子1(PD-1)配体基因(PD-L1/CD274)的表达,而HBx基因的H-box突变体的表达失去该抑制效应.结论 HBV/HBx具有抑制PD-L1/CD274基因表达的能力,在病毒感染的急性期解除抗原特异性T细胞激活的检查点,活化细胞毒性T细胞,这可能导致T细胞对高度复制的细胞进行攻击和清除,帮助病毒进入较低复制状态,达到病毒-宿主的平衡状态并奠定HBV慢性感染的基础.     

红景天苷壳聚糖纳米粒的制备及其体外释放性能研究

目的 以壳聚糖为载体制备红景天苷壳聚糖纳米粒(SA-CS-NPs),并考察其体外释药特性.方法 采用溶剂扩散-离子交联法制备SA-CS-NPs,考察其粒径分布和形态,并对SA-CS-NPs的包封率、载药量及其体外释药特性进行研究.结果 所制得的SA-CS-NPs呈球形或类球形,平均粒径为(247.5±23.8) nm(n=3),Zeta电位为(23.4±2.7) mV(n=3),多分散指数(PDI)为0.265±0.071(n=3);平均包封率为(70.15±1.60)％,平均载药量为(14.03±0.32)％(n=3);24h累积释放率达85％以上.结论 溶剂扩散-离子交联法制备SA-CS-NPs具有合适的粒径和包封率,并能达到缓释效果.